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當前位置：首頁產(chǎn)品中心生化檢測試劑盒-常量法糖代謝系列BC2450-50T/48S植物組織果糖含量測試盒 糖代謝

植物組織果糖含量測試盒 糖代謝
產(chǎn)品簡介：

儲存條件
2-8℃
中文名稱
植物組織果糖含量測試盒 糖代謝
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Plant Tissue Fructose Content Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號：BC2450-50T/48S

更新時間：2024-07-09

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪 問 量 ：2430

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品介紹

?；D(zhuǎn)移酶（AAT）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2350
規(guī)格：10T/9S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱規(guī)格保存條件
提取液液體15 mL×1瓶2-8℃保存
試劑一液體10 mL×1瓶2-8℃保存
試劑二粉劑×1支-20℃保存
試劑三液體1.5 mL×1支2-8℃保存
試劑四液體1mL×1支2-8℃保存
溶液的配制：

  1. 提取液：內(nèi)含不溶物，使用前搖勻；

  2. 試劑二：臨用前加蒸餾水1mL充分溶解，未用完的試劑2-8℃可以保存2周；

產(chǎn)品說明：
AAT是一個多功能蛋白大家族，主要負責催化生物體內(nèi)各種?；腿ヵ；磻?yīng)，在基因表達、代謝和信號傳導(dǎo)中具有重要作用。

AAT催化乙酰CoA轉(zhuǎn)移乙酰基到丁醇，同時還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測定412nm吸光度增加速率，來計算AAT活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。4℃，15000 g離心20min，取上清液待測。
2、血清（漿）樣本：直接檢測。（若液體有渾濁則離心后進行測定）
二、測定步驟

  1. 分光光度計預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至412nm，蒸餾水調(diào)零。

  2. 試劑一在37℃水浴保溫20min以上。

  3. 樣本測定：

 
試劑名稱（μL）空白管測定管
蒸餾水100-
上清液-100
試劑一（預(yù)熱）700700
試劑二5050
試劑三100100
試劑四5050
將上述試劑按順序加入1mL 玻璃比色皿中，加試劑四的同時開始計時，充分吹打混勻，在412nm波長下記錄第10s時的初始吸光度A1和130s后的吸光值A2，計算ΔA空=A2空-A1空、ΔA測=A2測-A1測、ΔA=ΔA測-ΔA空。空白只需做1-2次。
三、AAT活性計算
1、按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：37℃中每mL反應(yīng)體系下每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化0.001個單位為1個酶活單位。
AAT (U/mg prot) =ΔA÷0.001÷(Cpr×V樣) ÷T= 5000×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
2、按樣本質(zhì)量計算
單位的定義：37℃中每mL反應(yīng)體系下每克組織每分鐘催化吸光值變化0.001個單位為1個酶活單位。
AAT (U/g 質(zhì)量) =ΔA÷0.001÷(V樣÷V樣總×W) ÷T=5000×ΔA÷W
3、按血清體積計算
單位的定義：37℃中每mL反應(yīng)體系下每mL血清每分鐘催化吸光值變化0.001個單位為1個酶活單位。
AAT (U/mL 血清) =ΔA÷0.001÷V樣÷T=5000×ΔA
Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，需要另外測定；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.1mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，2min。
注意事項：

  1. 當吸光值大于1時，建議稀釋后測量。

  2. 如果ΔA測小于0.01，可以延長反應(yīng)時間，如測定10s和310s的吸光度，計算時相應(yīng)修改計算公式中反應(yīng)時間。

實驗實例：

  1. 取0.1g腎臟加入1mL提取液進行樣本處理，取上清后稀釋4倍后按測定步驟操作，測得ΔA空=A2空-A1空=0.105-0.101=0.004、ΔA測=A2測-A1測=0.665-0.479=0.186、ΔA=ΔA測-ΔA空=0.186-0.004=0.182，按樣本質(zhì)量計算酶活得：AAT (U/g 質(zhì)量) =5000×ΔA÷W×4（稀釋倍數(shù)）=36400 U/g 質(zhì)量。

  2. 取兔血清直接按照測定步驟操作，測得ΔA空=A2空-A1空=0.105-0.101=0.004、ΔA測=A2測-A1測0.622-0.521=0.101、ΔA=ΔA測-ΔA空=0.101-0.004=0.097，按血清體積計算酶活得：AAT (U/mL 血清) =5000×ΔA=5000×0.097=485 U/mL 血清。

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植物組織果糖含量測試盒 糖代謝 植物組織果糖含量測試盒 糖代謝

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