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當(dāng)前位置：首頁(yè)產(chǎn)品中心生化檢測(cè)試劑盒-常量法抗逆系列BC0090-50管/48樣過(guò)氧化物酶（POD）生化檢測(cè)試劑盒 抗逆系列

過(guò)氧化物酶（POD）生化檢測(cè)試劑盒 抗逆系列
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

過(guò)氧化物酶（POD）生化檢測(cè)試劑盒 抗逆系列
檢測(cè)方法可見(jiàn)分光光度法
POD廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可催化過(guò)氧化氫氧化酚類(lèi)和胺類(lèi)化合物，具有消除過(guò)氧化氫和酚類(lèi)、胺類(lèi)毒性的雙重作用。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

產(chǎn)品型號(hào)：BC0090-50管/48樣

更新時(shí)間：2024-04-03

廠(chǎng)商性質(zhì)：生產(chǎn)廠(chǎng)家

訪(fǎng) 問(wèn) 量 ：2866

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過(guò)氧化物酶（POD）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC0090
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱(chēng)規(guī)格保存條件
提取液液體60 mL×1瓶2-8℃保存
試劑一液體40 mL×1瓶2-8℃保存
試劑二液體0.04 mL×1瓶2-8℃保存
試劑三液體10 mL×1瓶2-8℃保存
溶液的配制：

  1. 試劑二：液體置于試劑瓶?jī)?nèi)EP管中，使用前需先離心。取0.01 mL試劑二加入3.2mL試劑一混合備用（約24T），現(xiàn)配現(xiàn)用，也可根據(jù)樣本量按比例配制。

產(chǎn)品說(shuō)明：
POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可催化過(guò)氧化氫氧化酚類(lèi)和胺類(lèi)化合物，具有消除過(guò)氧化氫和酚類(lèi)、胺類(lèi)毒性的雙重作用。POD催化H2O2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

  1. 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣本的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

  1. 血清（漿）樣本：直接檢測(cè)。

二、測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至470nm，蒸餾水調(diào)零。
2、測(cè)定前將試劑一、二和三37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）放置10min。
3、樣本測(cè)定表：
 
試劑名稱(chēng)（µL）測(cè)定管
樣本15
蒸餾水270
試劑一520
試劑二130
試劑三135
在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，立即混勻并計(jì)時(shí)，記錄470nm下30s時(shí)的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。計(jì)算ΔA=A2-A1。
三、POD活性計(jì)算

  1. 血清（漿）POD活性

單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T =7133×ΔA

  1. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞POD活性

  1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

  1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/g 質(zhì)量）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

  1. 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

單位定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/104 cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =14.27×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.07mL；V樣：加入樣本體積，0.015mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。
注意事項(xiàng)：

  1. 若一次性測(cè)定樣本較多，可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液，在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）放置10min以上，測(cè)定時(shí)加入15µL樣本和1055µL混合液測(cè)定。

  2. 如果ΔA小于0.005，可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到5min。如果ΔA大于0.5或者反應(yīng)液中有較多氣泡產(chǎn)生，可將樣本用提取液稀釋后測(cè)定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
取0.1043g大鼠心臟加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上，用提取液稀釋2倍后按照測(cè)定步驟操作，用玻璃比色皿測(cè)定并計(jì)算ΔA=A2-A1=0.363-0.134=0.229。按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：
POD（U/g 質(zhì)量）=7133×ΔA÷W×2（稀釋倍數(shù)）=3.132×104 U/g 質(zhì)量。
取0.1049g黃楊葉片，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上，按照測(cè)定步驟操作，用玻璃比色皿測(cè)定并計(jì)算ΔA=A2-A1=0.549-0.11=0.439。按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：
POD（U/g 質(zhì)量）=7133×ΔA÷W=2.985×104 U/g 質(zhì)量


相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

  1. Yin Y J, Chen C J, Guo S W, et al. The fight against Panax notoginseng root-rot disease using zingiberaceae essential oils as potential weapons[J]. Frontiers in plant science, 2018, 9: 1346.

  2. Dou S, Liu S, Xu X, et al. Octanal inhibits spore germination of Penicillium digitatum involving membrane peroxidation[J]. Protoplasma, 2017, 254(4): 1539-1545.

  3. Li B, Ding Y, Tang X, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)[J]. Food and Bioprocess Technology, 2019, 12(4): 563-574.

  4. Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019;162:364-373.(IF3.712)

  5. Yanjiao Yin,Chuanjiao Chen,Shiwei Guo,et al. The Fight Against Panax notoginseng Root-Rot Disease Using Zingiberaceae Essential Oils as Potential Weapons. Frontier in Immunology. October 2018;(IF4.716)

參考文獻(xiàn)：
[1] Reuveni R. Peroxidase Activity as a Biochemical Marker for Resistance of Muskmelon (Cucumis melo) to Pseudoperonospora cubensis[J]. Phytopathology, 1992, 82(7).
[2] Doerge D R, Divi R L, Churchwell M I. Identification of the Colored Guaiacol Oxidation Product Produced by Peroxidases[J]. Analytical Biochemistry, 1997, 250(1):10-17.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0190/BC0195  多酚氧化酶（PPO）活性檢測(cè)試劑盒
BC0210/BC0215  苯*解氨酶（PAL）活性檢測(cè)試劑盒
BC0170/BC0175  超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)試劑盒
BC0200/BC0205  過(guò)氧化氫酶（CAT）活性檢測(cè)試劑盒


 

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