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莽草酸脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

儲(chǔ)存條件
-20℃
莽草酸脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
有效期
6個(gè)月
單位

推薦
若使用96孔板測(cè)定,需使用96孔UV板,推薦貨號(hào)YA0602
英文名稱
Shikimic acid Dehydrogenase(SD) Activity Assay Kit
檢測(cè)方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規(guī)格
100T/96S

產(chǎn)品型號(hào):BC4185-100T/96S

更新時(shí)間:2024-04-12

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

訪 問 量 :926

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產(chǎn)品介紹


莽草酸脫氫酶(SD)活性檢測(cè)試劑盒說明書
微量法
貨號(hào): BC4185
規(guī)格: 100T/96S
產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱規(guī)格保存條件
提取液液體100 mL×1瓶2-8℃保存
試劑一液體10 mL×1瓶2-8℃保存
試劑二粉劑×12-8℃保存
試劑三粉劑×1-20℃保存
溶液的配制:
  1. 提取液:內(nèi)含不溶物,用前搖勻。

  2. 試劑二:臨用前加入5 mL蒸餾水溶解。

  3. 試劑三:臨用前每瓶加入10 mL蒸餾水溶解。

  4. 工作液的配制:根據(jù)用量按照試劑一:試劑二:試劑三為7:4:8的體積比例充分混勻,備用,用前25℃預(yù)熱15min

產(chǎn)品說明:
莽草酸途徑是存在于植物和微生物中的一條重要的代謝途徑,莽草酸脫氫酶(EC 1.1.1.25) 是莽草酸合成代謝途徑中催化第四步反應(yīng)的關(guān)鍵酶。
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產(chǎn)生NADPH,檢測(cè)340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、微量石英比色皿/96UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液(加入前搖勻))進(jìn)行冰浴勻漿,然后,8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
2、細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
3、液體:直接檢測(cè)。
二、測(cè)定步驟
  1. 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,紫外分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

  2. 工作液25℃預(yù)熱10min以上

  3. 操作表:在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入下列試劑

試劑名稱空白管測(cè)定管
工作液(µL)190190
樣本(µL)
10
蒸餾水(µL)10
加入樣本即開始計(jì)時(shí),充分混勻后于340nm處測(cè)定20s時(shí)的吸光值A15min20s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定-A1測(cè)定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。
三、SD酶活計(jì)算
A、按微量石英比色皿計(jì)算:
  1. 按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義:每毫克蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
SD酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×Cpr÷T=643×ΔA÷Cpr
  1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活定義:每克樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
SD酶活(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×W÷V樣總)÷T=643×ΔA÷W
  1. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義:每104個(gè)細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
SD酶活(U/104 cell)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬個(gè)))÷T
=643×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量(萬個(gè))
  1. 按液體體積計(jì)算

酶活定義:每mL液體樣本每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
SD酶活(U/mL=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷T=643×ΔA
εNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4L;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,5min;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol;V樣總:加入提取液體積,1mL。
B、按96UV板計(jì)算:
將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm96孔板光徑)進(jìn)行計(jì)算即可。

注意事項(xiàng):
  1. 樣本提取上清液置于冰上待測(cè),且樣本提取完成后建議2h內(nèi)測(cè)完。

  2. 樣本的蛋白濃度需自行測(cè)定,由于提取液中含有一定濃度的蛋白(約1 mg/mL),所以測(cè)定樣本蛋白濃度時(shí)需扣除提取液自身蛋白濃度。

  3. ΔA大于1時(shí),建議將樣本稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。當(dāng)ΔA小于0.01時(shí),可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(10min15min)來測(cè)定。

  4. 空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔,正常情況下,變化不超過0.01。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
  1. 取0.1g稗草,加入1mL提取液,進(jìn)行樣本處理,取上清按照測(cè)得步驟操作,用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.2771-0.2433=0.0338,ΔA空白管=A2空白-A1空白=0ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.0338,按照樣本質(zhì)量計(jì)算得:SD酶活(U/g 質(zhì)量)=643×ΔA÷W=217.334 U/g 質(zhì)量。

相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC2030/BC2035 異檸檬酸裂解酶(ICL)活性檢測(cè)檢測(cè)試劑盒
BC3170/BC3175 乙酸激酶(ACK)活性檢測(cè)試劑盒

莽草酸脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒  微量法 莽草酸脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒  微量法


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