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那些年對于ELISA試劑盒檢測數(shù)據的疑惑

更新時間:2021-08-27點擊次數(shù):1823


“隔壁的實驗室又發(fā)了3篇SCI文章,我們還在處理數(shù)據,這幾家的試劑盒檢測數(shù)據怎么都不一樣?"小編每當聽到這句話,每次感受都不同。對那些努力鉆研數(shù)據的學者、那些把青春獻給實驗室的研究生們表示深深的同情。那么,造成試劑盒檢測數(shù)據不一樣的原因,除了一些實驗操作、實驗環(huán)境等客觀因素外,還有試劑盒質量參數(shù),如重復率、板內差、板間差、線性稀釋、回收率等。但是,最重要的影響因素可能是作為檢測標尺的標準品。所以,下面我們就揭曉影響不同ELISA試劑盒檢測數(shù)據的差異和關于標準品的幾個疑惑。




不同的ELISA試劑盒如何進行校準?

國際標準物進行校準

目前,ELISA試劑盒校準方法為應用NIBSC/WHO推薦的標準品對試劑盒進行校準。


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高質量的原料進行校準

ELISA試劑盒的檢測指標種類可能遠遠多于NIBSC/WHO推薦的標準品,有時需要依靠高質量的ELISA試劑盒原料。目前,優(yōu)質的進口原料(如重組蛋白作為標準品)依然是生產高質量ELISA試劑盒的前提條件之一,但是不同品牌的蛋白表達體系和質控標準不同,可能會導致原料的性能不同,進而造成檢測數(shù)據的差異。


嚴謹?shù)纳飿颖具M行驗證

隨著國內生物技術的發(fā)展,自主研發(fā)蛋白表達、抗體制備、ELISA試劑盒開發(fā)技術也在不斷進步。除了應用NIBSC/WHO推薦的標準品對試劑盒進行校準外,也可用一些暫無相關機構認可的生物樣本進行驗證,按照科學研究方法,對種屬、性別、生命周期階段、種類等因素劃分所得到的生物樣本進行驗證。


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生物樣本驗證ELISA試劑盒的試驗數(shù)據



重組蛋白-ELISA試劑盒標準品的選擇

目前,國內外的雙抗夾心法ELISA試劑盒的標準品大多數(shù)屬于重組蛋白,競爭法ELISA標準品更多樣化,有可能為重組蛋白也可能為化學合成物質。為什么天然蛋白不用于作為標準品?雙抗夾心法ELISA試劑盒選擇重組蛋白為標準品的主要原因


第一,天然蛋白均存在于復雜的生物樣本中,大多數(shù)在細胞或組織中表達量可能較少,不能進行蛋白純化或者成本高昂,無法獲得大量的天然蛋白。


第二,ELISA試劑盒檢測基于抗體和抗原的特異性結合,在研究之初,通過重組蛋白進行免疫特定動物獲得特定的單克隆或者多克隆抗體,因此,抗體和免疫的抗原存在高親和力和高特異性。


第三,隨著蛋白表達技術的發(fā)展,重組蛋白和天然蛋白具有更高的相似度,特別是以酵母或細胞為代表的真核表達系統(tǒng)的發(fā)展,讓真核表達的重組蛋白具有更多的空間構象和生物活性。



ELISA試劑盒的標準品如何使用?

如果ELISA試劑盒的標準品是重組蛋白,請?zhí)崆?0-30分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫(18-25℃),如果試劑盒需分多次使用,請僅取出本次實驗所需的酶標板條和試劑,剩余板條和試劑需按照要求條件保存。

標準品工作液的配制將標準品的凍干粉末盡量集中到西林瓶或離心管底部,加入標準品/樣品稀釋液至凍干標準品中,室溫水平靜置10分鐘,讓重組蛋白恢復其空間構象,然后上下顛倒數(shù)次,待其充分溶解后,輕輕混勻,避免起泡,然后進行分裝和使用即可。


標準品的保存和棄用如果1個月內使用,ELISA試劑盒標準品可以暫存于4℃;如果1個月以上不用,標準品必須保存于-20℃以下環(huán)境;已配制好的標準品工作液如有剩余液體請切記要棄用,標準品工作液一定要現(xiàn)配現(xiàn)用。


索萊寶ELISA試劑盒研發(fā)平臺

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