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人P16蛋白酶檢測說明書

更新時(shí)間：2010-11-22點(diǎn)擊次數(shù)：2208

 

試劑盒使用說明書
 
使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測人P16蛋白，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
 
用途：   用于人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中P16蛋白的測定。
工作原理
本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中人P16蛋白的水平。向預(yù)先包被了人P16蛋白單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入P16蛋白，溫育；洗滌后，加入HRP標(biāo)記過的P16蛋白抗體。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中人P16蛋白的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成

1
標(biāo)準(zhǔn)品（16μg/ml）
0.5ml
7
顯色劑A液
6ml
2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3ml
8
顯色劑B液
6ml
3
酶標(biāo)包被板
12孔×8條
9
終止液
6ml
4
酶標(biāo)試劑
6ml
10
說明書
1份
5
30倍濃縮洗滌液
20ml
11
封板膜
2張
6
樣品稀釋液
6ml
12
密封袋
1個(gè)

需要而未提供的試劑和器材
1．   37℃恒溫箱。
2．   標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
3．   精密移液器及一次性吸頭
4．   蒸餾水，
5．   一次性試管
6．   吸水紙
注意事項(xiàng)
1．   從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．   各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差
3．   建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再按說明書操作進(jìn)行測定，計(jì)算時(shí)請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
4．   嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
5．   為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
6．   不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7．   底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中
標(biāo)本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作程序
1．   標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：

8μg/ml
（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）
120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
4μg/ml
（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）
120μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2μg/ml
（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）
120μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1μg/ml
（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）
120μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.5μg/ml
（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）
120μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2．   分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品50μl；在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。輕輕晃動(dòng)混勻，37℃溫育30分鐘。  
3．   棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。
4．   每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混勻，37℃溫育30分鐘。  
5．   棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。
6．   每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
7．   取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
8．   測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
9．   根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。
操作程序總結(jié)：
準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
 


 

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)30分鐘
 
 


 

洗板5次，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘
 
洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色10分鐘
 
加入終止液
 
15分鐘之內(nèi)讀OD值
 
計(jì)算
 
檢測范圍：0.2μg/ml→10μg/ml。
規(guī)格：    96T/盒
保存：    2-8℃
有效期：  6個(gè)月（2-8℃）。
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