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人P16蛋白酶聯(lián)免疫檢測

更新時間：2010-10-18點擊次數(shù)：2118

 

人P16蛋白酶聯(lián)免疫檢測
試劑盒使用說明書
 
使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測人P16蛋白，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
 
用途：   用于人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中P16蛋白的測定。
工作原理
本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中人P16蛋白的水平。向預(yù)先包被了人P16蛋白單克隆抗體的酶標孔中加入P16蛋白，溫育；洗滌后，加入HRP標記過的P16蛋白抗體。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中人P16蛋白的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成

1
標準品（16μg/ml）
0.5ml
7
顯色劑A液
6ml
2
標準品稀釋液
3ml
8
顯色劑B液
6ml
3
酶標包被板
12孔×8條
9
終止液
6ml
4
酶標試劑
6ml
10
說明書
1份
5
30倍濃縮洗滌液
20ml
11
封板膜
2張
6
樣品稀釋液
6ml
12
密封袋
1個

需要而未提供的試劑和器材
1．   37℃恒溫箱。
2．   標準規(guī)格酶標儀。
3．   精密移液器及一次性吸頭
4．   蒸餾水，
5．   一次性試管
6．   吸水紙
注意事項
1．   從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．   各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差
3．   建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再按說明書操作進行測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
4．   嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
5．   為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
6．   不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7．   底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中
標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作程序
1．   標準品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：

8μg/ml
（5號標準品）
120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液
4μg/ml
（4號標準品）
120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液
2μg/ml
（3號標準品）
120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液
1μg/ml
（2號標準品）
120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液
0.5μg/ml
（1號標準品）
120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液

2．   分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入稀釋好的標準品50μl；在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。輕輕晃動混勻，37℃溫育30分鐘。  
3．   棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。
4．   每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育30分鐘。  
5．   棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。
6．   每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
7．   取出酶標板，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
8．   測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
9．   根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。
操作程序總結(jié)：
準備試劑，樣品和標準品
 


 

加入準備好的樣品和標準品，37℃反應(yīng)30分鐘
 
 


 

洗板5次，加入酶標試劑，37℃反應(yīng)30分鐘
 
洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色10分鐘
 
加入終止液
 
15分鐘之內(nèi)讀OD值
 
計算
 
檢測范圍：0.2μg/ml→10μg/ml。
規(guī)格：    96T/盒
保存：    2-8℃
有效期：  6個月（2-8℃）。
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